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创烨生物:丙氨酸氨基转移酶测定试剂使用说明、性能指标  
发布者:idrfz.chen   
 

 (本试剂仅用于科研、实验、技术支持,不直接用于临床诊断)

【简介】

用于自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性。

人体多种脏器都含有ALT,主要分布在肝、肾、心、肌肉,肝内ALT活性远远超过其它脏器的活性,主要存在肝细胞质的可溶性部分,故测定ALT活性可反映肝脏损害具有特殊的意义。

【测定方法】

 IFCC推荐速率法

ALT

【测定原理】

LDH

L—丙氨酸+α酮戊二酸             丙酮酸+谷氨酸

丙酮酸+NADH+H             L—乳酸+NAD++H2O

NADH的减少,引起在波长340nm处的吸光度下降,下降速率与ALT活性成正比 

【试剂盒组成】

 

    

    

    

试剂

液体双试剂,

试剂Ⅰ:试剂Ⅱ=2:1

Tris缓冲液、NADHLDH

L-丙氨酸、α-酮戊二酸

适量

【样本要求】

不溶血血清或肝素抗凝血浆。样品中丙氨酸氨基转移酶在2-8℃可稳定7天。

【测定步骤】

1.本试剂为液体双试剂,可直接使用。

2.测定参数:波长:340nm;光径:10mm;温度:37℃。

3.测定方法:

加入物

空白管

测定管

试剂Ⅰ

150

150

蒸馏水(uL)

9

-

标准液(uL)

-

-

样本(uL)

-

9

混匀,置37℃孵育1-5分钟

试剂Ⅱ(uL)

75

75

混匀,置37℃延滞1分钟后读取各管吸光度,每隔1分钟读1次,共读3分钟,计算平均每分钟吸光度变化率ΔA/min

4.上机参数:

  

37

延迟时间

60

样本量

9uL

  

340nm

试剂Ⅰ

150uL

  

450nm

试剂Ⅱ

75uL

读数时间

180

 

5.计算:

             

(ΔAU/min –ΔAB/min×TV×103

ALT活性(U/L)=                            = (ΔAU/min –ΔAB/min×K

ε×SV×L

式中: TV 总反应物体积(μl);

            SV 样本体积(μl);

           ε NADH在340nm处的毫摩尔吸光系数为6.22;

            L  比色杯光径(cm)。

            K=-4180 (1.0cm光径)

【性能指标】

1 空白吸光度A1.000

2 线性范围0 -800U/L

3 批内/分析内精密度  CV5%;批间相对极差 7%;

4 准确性  相对偏差不超过±10%。

5 抗干扰性  血清胆红素<258umol/LTG<12mmol/L、维生素<100mg/L、丙酮酸<500μmol/L,对测定结果无显著影响,中等度溶血标本(Hb1000mg/L),测定结果无显著影响;明显溶血(Hb 2800mg/L)标本,测定结果偏低。

6 方法对照  本试剂盒检测方法与赖氏法进行相关性比较试验,结果如下:Y=0.9895X-2.2r=0.9986n=30Y为本法试剂,X为赖氏法试剂。

【注意事项】

1、试剂和样品可因仪器要求不同,按比例增减,计算公式不变。

2、试剂请放2-8储存,避免冷冻、污染,否则将导致失效。

3、高脂或黄疸样本在340nm处有较高的吸收值。在这些样本的测定中,高活性的丙氨酸氨基转移酶虽然可能将底物耗尽,但在340nm处仍有较高吸收值,此时样本应稀释后再测试。

4、请勿用嘴直接吸取试剂,避免接触皮肤、眼睛及粘膜,一旦接触,应即用水冲洗污染部位;

5、建议使用Roche多项校准血清校准K值,校准周期为30天,更换试剂批号时需要重新校准。使用正常值和病理值生化质控血清进行室内质控,测定的控制值应在确定的限制范围内,若控制值失控,实验室应采取适当的纠正措施。

6、可以采用单一试剂模式进行检测,临用时将试剂与试剂2:1比例混合。若混合后试剂空白小于1.000(以水为空白,340nm波长、1cm光径)时,表明试剂已失效。

【参考范围

8 -40U/L37℃) 

建议各地建立本地区的参考值范围。

【储存条件与有效期】

未开封的试剂在2-8℃避光条件下可稳定12个月,置37℃水浴至少可稳定7天。

试剂开封后,存放在分析仪试剂仓中的试剂在30天内性质稳定。

【参考文献】

1. Clin. Chem. Acta 105 (1980) S. 147 - 172.

2. Synopsis der Leberkrankheiten: H. Wallh?fer, E. Schmid u. F. W. Schmidt, G. Thieme Verlag, Stuttgart 1974.

3. Thefeld W. et al, Dt. Med. Wschr. 99 (1974), 343.


 


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