（本试剂仅用于科研、实验、技术支持，不直接用于临床诊断） 【简介】 用于自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性。 人体多种脏器都含有ALT，主要分布在肝、肾、心、肌肉，肝内ALT活性远远超过其它脏器的活性，主要存在肝细胞质的可溶性部分，故测定ALT活性可反映肝脏损害具有特殊的意义。 【测定方法】 IFCC推荐速率法 【测定原理】L—丙氨酸+α—酮戊二酸 丙酮酸+谷氨酸丙酮酸+NADH+H L—乳酸+NAD++H2O NADH的减少，引起在波长340nm处的吸光度下降，下降速率与ALT活性成正比 。 【试剂盒组成】 | 规 格 | 组 份 | 浓 度 | 试剂 | 液体双试剂， 试剂Ⅰ：试剂Ⅱ=2:1 | Tris缓冲液、NADH、LDH、 L-丙氨酸、α-酮戊二酸 | 适量 |
【样本要求】 不溶血血清或肝素抗凝血浆。样品中丙氨酸氨基转移酶在2-8℃可稳定7天。 【测定步骤】 1.本试剂为液体双试剂，可直接使用。 2.测定参数：波长：340nm；光径：10mm；温度：37℃。 3.测定方法： 加入物 | 空白管 | 测定管 | 试剂Ⅰ | 150 | 150 | 蒸馏水(uL) | 9 | - | 标准液(uL) | - | - | 样本(uL) | - | 9 | 混匀，置37℃孵育1-5分钟 | 试剂Ⅱ(uL) | 75 | 75 | 混匀，置37℃延滞1分钟后读取各管吸光度，每隔1分钟读1次，共读3分钟，计算平均每分钟吸光度变化率ΔA/min |
4.上机参数： 温 度 | 37℃ | 延迟时间 | 60秒 | 样本量 | 9uL | 主 波 长 | 340nm | 试剂Ⅰ | 150uL | 副 波 长 | 450nm | 试剂Ⅱ | 75uL | 读数时间 | 180秒 |
5.计算： （ΔAU/min –ΔAB/min）×TV×103 ALT活性（U/L）= = （ΔAU/min –ΔAB/min）×K ε×SV×L 式中： TV 总反应物体积（μl）； SV 样本体积（μl）； ε NADH在340nm处的毫摩尔吸光系数为6.22； L 比色杯光径（cm）。 K=-4180 (1.0cm光径) 【性能指标】 1、 空白吸光度A≧1.000； 2、 线性范围0 -800U/L。 3、 批内/分析内精密度 CV≤5％；批间相对极差 ≤7％； 4、 准确性 相对偏差不超过±10％。 5、 抗干扰性 血清胆红素<258umol/L、TG<12mmol/L、维生素<100mg/L、丙酮酸<500μmol/L，对测定结果无显著影响，中等度溶血标本（Hb约1000mg/L），测定结果无显著影响；明显溶血（Hb 2800mg/L）标本，测定结果偏低。 6、 方法对照 本试剂盒检测方法与赖氏法进行相关性比较试验，结果如下：Y=0.9895X-2.2，r=0.9986，n=30，Y为本法试剂，X为赖氏法试剂。 【注意事项】 1、试剂和样品可因仪器要求不同，按比例增减，计算公式不变。 2、试剂请放2-8℃储存，避免冷冻、污染，否则将导致失效。 3、高脂或黄疸样本在340nm处有较高的吸收值。在这些样本的测定中，高活性的丙氨酸氨基转移酶虽然可能将底物耗尽，但在340nm处仍有较高吸收值，此时样本应稀释后再测试。 4、请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应即用水冲洗污染部位； 5、建议使用Roche多项校准血清校准K值，校准周期为30天，更换试剂批号时需要重新校准。使用正常值和病理值生化质控血清进行室内质控，测定的控制值应在确定的限制范围内，若控制值失控，实验室应采取适当的纠正措施。 6、可以采用单一试剂模式进行检测，临用时将试剂Ⅰ与试剂Ⅱ按2:1比例混合。若混合后试剂空白小于1.000（以水为空白，340nm波长、1cm光径）时，表明试剂已失效。 【参考范围】 8 -40U/L（37℃） 建议各地建立本地区的参考值范围。 【储存条件与有效期】 未开封的试剂在2-8℃避光条件下可稳定12个月，置37℃水浴至少可稳定7天。 试剂开封后，存放在分析仪试剂仓中的试剂在30天内性质稳定。 【参考文献】 1. Clin. Chem. Acta 105 (1980) S. 147 - 172. 2. Synopsis der Leberkrankheiten: H. Wallh?fer, E. Schmid u. F. W. Schmidt, G. Thieme Verlag, Stuttgart 1974. 3. Thefeld W. et al, Dt. Med. Wschr. 99 (1974), 343.
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