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【特别推荐】:甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)测定试剂使用说明、性能指标、上机参数  
发布者:idrfz.chen   
 

 (本试剂仅用于科研、实验、技术支持,不直接用于临床诊断)

简介】

本试剂仅供定量测定人血清中甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶 (GPDA)的活性。

原发性肝癌和继发性肝癌病人血清GPDA活性升高。在血清AFP阴性和阳性的原发性肝癌病人中,血清GPDA升高的阳性率基本一致,而肝血管瘤病人的血清GPDA活性在正常范围。70%以上的胃癌病人的血清GPDA明显下降,胃癌切除后,病人血清GPDA呈回升趋势。血清GPDA测定对鉴别肝脏良恶性病变、监测癌的肝转移和胃癌的检测 ,均具有意义。药物性肝损害、原发性胆汁性肝硬变引起肝内胆汁郁积者,血清GPDA活性升高,临床应用中应予注意。

【测定方法】

连续监测法

                                               GPDA

【测定原理】

甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺 ---------- 甘氨酰脯氨酸 + 对硝基苯胺

反应产生的对硝基苯胺在405nm有最大吸收峰,测定吸光度上升的速率与GPDA的活性成正比。

【试剂盒组成】

 

    

    

    

试剂

液体双试剂31

Tris缓冲液甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺

适量

GPDA质控品

冻干1ml

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶、稳定剂

见标签

【样本要求】

新鲜非溶血血清。样品中的GPDA2-8°C时可保存2天;-20°C时可保存30天。

【测定步骤】

1.本试剂为液体双试剂,可直接使用。

2.测定参数:波长:405nm410nm;光径:10mm;温度:37℃。

3.测定方法:

加入物

空白管

测定管

R1(uL)

225

225

蒸馏水(uL)

15

--

样本量(uL)

--

15

37℃保温300s

R2(uL)

75

75

37℃延迟30s,测定90s内吸光度变化值△A,再计算每分钟吸光度变化速率△A/min

4.上机参数:

  

37

延迟时间

30

样本量

15uL

  

405nn410nm

试剂Ⅰ

225uL

  

600nm

试剂Ⅱ

75uL

读数时间

90

理论K

3241405nm)或3746410nm

 5.计算: 

GPDA(U/L) =(AU/min-AB/min)×K

消光系数: GPDA的摩尔消光系数为6749(405nm) 5606(410nm)

理论K值: 主波长为405nmK=3241  主波长为410nmK=3746

【性能指标】

1 空白吸光度A405nm<1.000,空白吸光度变化速率ΔA/min0.0035

2 线性范围0-600 U/L (r >0.99)

3 批内/分析内精密度  CV5%;批间相对极差 8%;

4 准确性  相对偏差不超过±10%。

5 抗干扰性  血清胆红素<342umol/LTG<11mmol/L、血红蛋白<1000mg/dL、抗坏血酸<45mg/dL时,对测定无显著影响。

6 方法对照  用本酶动力学测定试剂和Kojima.J等文献等报道方法,进行相关性比较试验测定30例血清GPDA活性,结果显示相关系数r = 0.998

【注意事项】

1、试剂和样品可因仪器要求不同,按比例增减,计算公式不变。

2、试剂请放2-8储存,避免冷冻、污染,否则将导致失效。

3当标本浓度超过检测范围时,应用生理盐水稀释标本后再进行检测,标本值为测定值乘以稀释倍数。

4、请勿用嘴直接吸取试剂,避免接触皮肤、眼睛及粘膜,一旦接触,应即用水冲洗污染部位;

5、使用正常值和病理值生化质控血清进行室内质控,测定的控制值应在确定的限制范围内,若控制值失控,实验室应采取适当的纠正措施。

【参考范围

成人  血清44-116 U/L37℃) 

建议各地建立本地区的参考值范围

【储存条件与有效期】

未开封的试剂在2-8℃避光条件下可稳定12个月,置37℃水浴至少可稳定7天。

试剂开封后,存放在分析仪试剂仓中的试剂在30天内性质稳定。

【参考文献】

1.杨甲梅、吴孟起  中华医学检验, 1990131):2     

2.Takashi Het at,Hepatology,1994 191414

 

全自动生化分析仪参数

 日立7020参数

参数号
界面内容
1
分析项目GPDA
2
分析方法RateA
4
反应时间10
5
测光点122
6
测光点226
9
次波长600
10
主波长405
11
样本量15
12
R1试剂量225
13
R1位置#
14
R1瓶尺寸L
15
R2量0
16
R2位置0
17
R2瓶尺寸0
18
R3量75
19
R3位置#
20
R3瓶尺寸S
21
校准模式linear
23
校准液Con.10
24
校准液pos.199
25
校准液Con.20
26
校准液pos.20
27
校准液Con.30
28
校准液pos.30
29
校准液Con.40
30
校准液pos.40
31
校准液Con.50
32
校准液pos.50
33
校准液Con.60
34
校准液pos.60
36
K1因数3241
44
偏移吸光度值999.9
45
离散允许吸光32000
47
S1ABS下限-32000
48
S1ABS上限32000
49
反应吸光度界32000
50
反应方向I
54
正常值下限44
55
正常值上限116

 

日立7060/7080参数
TEST NAMEGPDA
ASSAY TYPERateA
Wavelength(2nd/primary)600/405
Time10
Point20-24
Sample vol15
Reagent R1225
Reagent R20
Reagent R375
Reagent R40
Abs.limit32000
Dec/incInc
CAL.TYPElinear
Point1
Span point0
STD(1)-Conc.pos0-water
STD(n)-Conc.pos---
SD limit999.9
UnitU/L
K-factor3241
 
,Abs.limit
日立7170/7180/7600参数
TEST NAMEGPDA
ASSAY TYPERateA
Wavelength(2nd/primary), ,
600/405
Time10
Point20-24
Sample vol15
Reagent R1225
Reagent R20
Reagent R375
Reagent R40
32000
Dec/incInc
CAL.TYPElinear
Point1
Span point0
STD(1)-Conc.pos0-water
STD(n)-Conc.pos---
SD limit999.9
UnitU/L
K-factor3241
 
奥林帕斯系列
Test NameGPDA
Sample Volume15
ReagentR1 Volume225
R2 Volume75
Wave-LengthPri410
Sec600
MethodRate
Reaction Slope+
Measuring Point 1:First/Last14-18
Measuring Point 2:First/Last 
Linearity30%
No Lag-TimeYes
Min OD  Max OD  L-H-2.5000-2.5000
Reagent
OD Limit
Fst  L-H
-2.50000
,
Lst  L-H2.5000
Dynamic Ranger    L-H0-600
Calibration FactorA1
B0
Calibration  TypeMB
FormulaY=AX+B
,
Conc
输入校准品浓度
MB Type Factor 
BECKMAN-LX20
ChemGPDA
Reaction TypeRate1
Reaction DirectionPositive
UnitU/L
Math ModleLinear
Primary Wavelength410
Secondary Wavelength600
Cal.Time Limit0Hours
K Factor7492
First Inject VolA/225μl
Secondary
Inject Vol/Inject Time
B/75μl/-180Sec
Third Inject Vol/Inject TimeNone/0μl/0Sec
Sample Volume15μl
Reagent Blank Start Time-60
End Read-40
Reaction1 Start Time60
End Read120
Reaction2 Start Time 
End Read 
Usable Result Lower Limit0
Upper Limit600
Initial Rate99.999
AEROSET/C-8000 /TBA120
NameGPDA
Reaction modeRate Up
Primary wavelength404
Secondary wavelength604
Main read time19-23
Flex read time18-22
Blank read time 
Last read time33
Absorbance range0.000-2.800
Sample blank type 
Blank assay 
Sample volume15
R1 reagent volume225
R1 water volume0
R1 Dispense modeType0
R2 reagent volume75
R2 water volume0
R2 Dispense modeType0
Calibration methodLinear
Calibration Level 1Water 0
Calibration Level 2 
Factor3241
Blank absorbance range0.0000-0.5000
Linearity range0-600
Result concentration unitU/L
Result decimal places0
BECKMAN-CX系列
Test NameGPDA
Reaction TypeRate1
Reaction DirectiomPositive
UnitsU/L
Decimal PrecisionX
Calculation factor3746
Math ModelLinear
Primary Wavelength410
Secondary Wavelength600
Sample Volume15
Primary Inject RgtA225
Primary Inject RgtB75
Secondary Inject RgtB 
Add Time 
Blank    Start Read300
End Read316
         Lowe Abs Limit-1.5
         High Abs Limit1.5
Recation  Start Read30
         End Read90
         Lowe Abs Limit-1.5
         High Abs Limit1.5
Usable Range Lower Limit0
         Uppert Limit600
         Initial99.9
         Delta Abs1.5
 


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