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【特别推荐】:血清总胆汁酸(TBA)测定试剂使用说明、性能指标  
发布者:idrfz.chen   
 

(本试剂仅用于科研、实验、技术支持,不直接用于临床诊断)

【简介】

用于全自动生化分析仪测定人体血清总胆汁酸含量。

胆汁酸的生成和代谢与肝脏有十分密切的关系,血清胆汁酸水平是反映肝脏实质损伤的一个重要指标。急性肝炎TBA显著增高,可达正常水平的10~100倍。TBA水平超过20 umol/L可能为慢性肝炎。肝硬化、乙醇性肝病、中毒性肝病、胆汁淤积等,血清TBA水平都会增高。而当回肠机能有障碍时,血清中胆汁酸含量会下降。

【测定方法】

第五代循环酶速率法

【测定原理】

血清中胆汁酸根据3?-羟类固醇脱氢酶(3?-HSD)及? –硫烟酰胺腺苷二核苷酸氧化型(Thio-NAD)被氧化,生成3-酮类固醇? –硫烟酰胺腺苷二核苷酸还原型(Thio-NADH),生成的3-酮类固醇在3?-HSD? –硫烟酰胺腺苷二核苷酸还原型(NADH)的作用下,生成胆汁酸及? –硫烟酰胺腺苷二核苷酸氧化型(NAD)。通过酶的循环反应,微量的胆汁酸被扩增,通过测定生成的Thio-NADH吸光度的变化而求得血清中胆汁酸的浓度。

【试剂盒组成】

 

    

    

    

试剂

液体双试剂,

试剂Ⅰ:试剂Ⅱ=31

缓冲液、THIO-NAD3α-HSDNADH

适量

TBA校准品

液体

甘氨胆酸钠、稳定剂

50μmol/L

【样本要求】

不溶血血清或血浆。样本中的胆汁酸在2~8℃条件下可保存一周,-20℃条件下可保存三个月。

【测定步骤】

1.本试剂为液体双试剂,可直接使用。

2.测定参数:波长:405nm;光径:10mm;温度:37

3.测定方法:

加入物

空白管

校准管

测定管

试剂Ⅰ

270

270

270

蒸馏水(uL)

4

-

-

标准液(uL)

-

4

-

样本(uL)

-

-

4

混匀,置37℃孵育5分钟

试剂Ⅱ(uL)

90

90

90

混匀,置37℃延滞1分钟后读取各管吸光度,每隔1分钟读1次,共读3分钟,计算平均每分钟吸光度变化率ΔA/min

4.上机参数:

  

37

延迟时间

60

样本量

4uL

  

405nm

试剂Ⅰ

270uL

  

660nm

试剂Ⅱ

90uL

读数时间

180

5.计算:

(ΔAU/min –ΔAB/min

TBA(μmol/L)=                    ×准管浓度

(ΔAS/min –ΔAB/min

【性能指标】

1 空白吸光度A405nm<0.60,空白吸光度变化速率ΔA/min0.010

2 测定试剂灵敏度  50μmol/L校准品吸光度变化速率ΔA/min0.080

3 线性范围0-180μmol/L (r >0.99)

4 批内/分析内精密度  CV6%;批间相对极差 8%;

5 准确性  相对偏差不超过±10%。

6 抗干扰性  500mg/dL血红蛋白、100mg/dL抗坏血酸、50mg/dL胆红素对测定结果无明显干扰。

7 方法对照  用本酶动力学测定试剂和某进口TBA浓度试剂盒 Total Bile Acids Test Kit 测定50例血清TBA浓度,结果显示相关系数r = 0.993

【注意事项】

1、试剂和样品可因仪器要求不同,按比例增减,计算公式不变。

2、试剂请放2-8℃储存,避免冷冻、污染,否则将导致失效。

3、样品请尽量使用新鲜血清,进餐后血清中总胆汁酸的浓度上升,请注意采血时间,不进行负荷试验时,请遵守早晨空腹采血。

4、请勿用嘴直接吸取试剂,避免接触皮肤、眼睛及粘膜,一旦接触,应即用水冲洗污染部位;

5、使用使用本公司提供的校准品校准,校准周期为30天,更换试剂批号时需要重新校准。使用正常值和病理值生化质控血清进行室内质控,测定的控制值应在确定的限制范围内,若控制值失控,实验室应采取适当的纠正措施。

6、各种抗凝剂一般用量对测试无影响。

【参考范围

0-10μmol/L

建议各地建立本地区的参考值范围。

【储存条件与有效期】

未开封的试剂在2-8℃避光条件下可稳定12个月,置37℃水浴至少可稳定7天。

试剂开封后,存放在分析仪试剂仓中的试剂在30天内性质稳定。

【参考文献】

1. Lorentz K. Approved recommendation on EFCC methodsfor the measurement of catalytic concentration of enzymes.Part 9. IFCC method for ?-amylase (1,4-?-D-Glucan-4-glucanohydrolase, EC 3.2.1.1). Clin Chem Lab Med 1998;38:185-203.

 


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