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【特别推荐】:髓过氧化物酶(MPO)测定试剂(双通道)使用说明、性能指标  
发布者:idrfz.chen   
 

(本试剂仅用于科研、实验、技术支持,不直接应用于临床诊断)

【简介】

用于全自动生化分析仪双通道法测定血清或血浆样品中髓过氧化物酶(MPO)的活性。

MPO的结构髓过氧化物酶(MPO)是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶,在多形核中性粒细胞和单核细胞中的嗜天青颗粒中大量表达并储存,在炎症反应时分泌。MPO升高是心血管系统炎症的指标之一,而且可能是动脉粥样硬化和冠状动脉疾病的危险指标。

【测定方法】

连续监测法

【测定原理】

MPO的检测通过2步反应实现。

第一步,测定样品中总过氧化物酶活性:总过氧化物酶催化试剂中的底物分解并与4-AA 色源反应,检测反应速率ΔA1,与标准比较后得出样品中总过氧化物酶(TS)活性。

第二步,测定样品中非髓过氧化物酶活性:用特异性抑制剂抑制住样本中髓过氧化物酶活性,剩余的非髓过氧化物酶催化试剂中的底物分解并与4-AA 色源反应,检测反应速率ΔA2,与标准比较后得出样品中非髓过氧化物酶(NS)活性。

将总过氧化物酶活性(TS)减去非髓过氧化物酶(NS)活性得到样品中髓过氧化物酶(MPO)活性。

【试剂盒组成】

 

    

    

    

总过氧化物酶试剂Ⅰ(TR1)

 

GOOD’S缓冲液,4-AAP

适量

非髓过氧化物酶试剂Ⅰ(NR1)

 

GOOD’S缓冲液,4-AAPMPO抑制剂

适量

试剂Ⅱ(R2)

 

底物液,色源

适量

MPO校准品

冻干1ml

髓过氧化物酶、稳定剂

见标签

MPO质控品

冻干1ml

髓过氧化物酶、稳定剂

见标签

【样本要求】

样本为新鲜无溶血的血清或肝素锂抗凝血浆,样本中MPO活性在2-8 °C条件保存可稳定2-5天。

【测定步骤】

1.本试剂为液体双试剂,可直接使用。

2.测定参数:主/副波长:505/660nm;光径:10mm;温度:37℃。

3.测定方法:

3.1 总过氧化物酶

加入物

校准管1

校准管2

测定管

TR1(μL)

180

180

180

校准品1(μL)

25

-

-

校准品2(μL)

-

25

-

样本(μL)

-

-

25

混匀,置37℃孵育3~5分钟

 R2(μL)

60

60

60

混匀,置37℃延滞1分钟后读取各管吸光度,每隔1分钟读1次,共读2分钟,计算平均每分钟吸光度变化率ΔA/min

3.2 非髓过氧化物酶

加入物

校准管1

校准管2

测定管

NR1(μL)

180

180

180

校准品1(μL)

25

-

-

校准品2(μL)

-

25

-

样本(μL)

-

-

25

混匀,置37℃孵育3~5分钟

R2(μL)

60

60

60

混匀,置37℃延滞1分钟后读取各管吸光度,每隔1分钟读1次,共读2分钟,计算平均每分钟吸光度变化率ΔA/min

4.上机参数:

  

37

延迟时间

60

样本量

25μL

  

505nm

TR1/ NR1

180μL

  

660nm

R2

60μL

读数时间

120

5.计算:

 

总过氧化物酶(TS)活性(U/L) =(ΔAU/min –ΔAB/min)/(ΔAS/min –ΔAB/min) ×校准管总过氧化物酶(TS)活性

 

非髓过氧化物酶(NS)活性(U/L) =(ΔAU/min –ΔAB/min)/(ΔAS/min –ΔAB/min)×校准管非髓过氧化物酶(NS)活性

 

髓过氧化物酶(MPO)活性(U/L)= 总髓过氧化物酶(TS)活性 -非髓过氧化物酶(NS)活性

 

【性能指标】

1 空白吸光度  0.100

2 线性范围0-130 U/L 0-1300 ng/mL),r0.990

3 批内/分析内精密度  CV6%;批间相对极差 8%;

4 准确性  相对偏差不超过±10%。

5 抗干扰性  抗坏血酸≤0.2mmol/LTG ≤ 1000 mg/dlTBil ≤40 mg/dl对本法测定无干扰。

6、本试剂盒检测方法与某进口试剂进行相关性比较试验,结果如下:Y=0.998X+0.22r=0.998n=50Y为本法测定结果,X为进口试剂测定结果。

【注意事项】

1、试剂变混浊或空白吸光度值>0.100时,将不能使用,应弃去;

2、建议各实验室建立自己的正常值范围;

3、试剂与样本量可根据需要按比例调节;

4、请勿用嘴直接吸取试剂,避免接触皮肤、眼睛及粘膜,一旦接触,应即用水冲洗污染部位;

5、使用配套的校准品校准,校准周期为30天,更换试剂批号时需要重新校准。建议使用正常值和病理值生化质控血清进行室内质控,测定的控制值应在确定的限制范围内,若控制值失控,实验室应采取适当的纠正措施。

6、当标本浓度超过检测范围时,应用生理盐水稀释标本后再进行检测,标本值为测定值乘以稀释倍数。

【参考范围

12.7U/L    127ng/mL

建议各实验室建立自己的正常值参考范围。

【储存条件与有效期】

未开封的试剂在2-8℃避光条件下可稳定14个月,置37℃水浴至少可稳定7天。

试剂开封后,存放在分析仪试剂仓中(2-8)的试剂在30天内性质稳定。

【参考文献】

1Nilsson L. et al. (1988) Activation of inflammatory system during cardiopulmonary bypass. Scand. J. Thorac. Cardovasc. Surg. 22: 51-53.

2Carlsen K. H. (1997) Markers of airway inflammation in preschool wheezers. Monaldi Arch. Chest Dis. 52(5): 455-460.

 


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