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【特别推荐】:同型半胱氨酸检测测定试剂使用说明、性能指标  
发布者:idrfz.chen   
 

 (本试剂仅用于科研、实验、技术支持,不直接用于临床诊断)

【简介】

用于体外定量测定人或血浆中同型半胱氨酸(HCY)的含量。

同型半胱氨酸(HCY) 是心脑血管病的独立危险因素。HCY又称高半胱氨酸,是蛋氨酸的中间代谢产物。HCY水平与心脑血管疾病密切相关,HCY增高可刺激血管壁引起动脉血管损伤,导致炎症和管壁斑块形成,目前国内外已将HCY作为心脑血管疾病的常规检测指标,用于预知动脉粥样硬化的危险性。HCY升高还可引起神经管畸形及先天性畸形等出生缺陷类疾病。

【测定方法】

速率法

【测定原理】

丝氨酸+ 同型半胱氨酸    CBS    L-胱硫醚

L-胱硫醚     CBL    同型半胱氨酸+丙酮酸+ NH3

丙酮酸+ NADH     LD     乳酸+ NAD+

在340nm波长下检测吸光度下降速率,下降速率与样本中HCY含量成正比。

【试剂盒组成】

 

    

    

    

试剂

液体8:1

乳酸脱氢酶 (LD);胱硫醚β-合成酶(CBS);胱硫醚β-分解酶(CBL);丝氨酸(SER);烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)

适量

【样本要求】

1、空腹采血,采血前不宜做剧烈运动。

2、可用干燥管、肝素抗凝管采血加塞送检。

3、避免采用溶血、乳穈状样品。血液分离血清后2~8℃可稳定一周。

【测定步骤】

1、本试剂为液体双试剂,可直接使用。

2、测定参数:主/副波长:340nm/405nm;反应方向:负反应;反应时间:样本与R1混匀后孵育

3~5分钟,加入R2孵育60秒后,读取2分钟内吸光度,求得每分钟吸光度变化率△A/min。

3、测定方法:

加入物

空白管

校准管(S)/样本管(T

蒸馏水(uL)

13

-

校准液/样本(μl

-

13

试剂Ⅰ(uL)

200

200

混匀,37℃孵育35分钟

试剂Ⅱ(uL)

25

25

混匀,37孵育60秒后,读取2分钟内吸光度,求得每分钟吸光度变化率△A/min

4、校准:校准类型为线性(linear), 建议采用试剂配套或具有溯源性的校准品。

5、质量控制:建议每天采用正常和异常水平质控品进行内部质量控制。

6、结果计算:HCY(μmol/L)=样本△A/min /校准品△A/min×校准液浓度。

【性能指标】

1、灵敏度:浓度为28μmol/L的样品,吸光度变化值(△A)应≥0.010。

2、特异性:胆红素<342μmol/L,甘油三酯<5.6mmol/L,血红蛋白<2.0g/L,维生素C<0.3g/L对测定结果造成的干扰,偏倚在±15%内。

3、试剂空白吸光度(A)≥1.0。

4、准确性:测定定值质控品测值在控。

5、线性范围:(0~50.0)μmol/L,r2≥0.990。

6、精密度:批内变异系数(CV)≤4%,批间变异系数(CV)≤6%。

【检验方法的局限性】

1、用于测定线性范围内的样品,如样本超出线性,用生理盐水稀释后测定,结果乘稀释倍数报告。

2、溶血样品对检验结果造成正偏差。

【注意事项】

1、 试剂、样本比可根据仪器要求,按比例进行适当调整。

2、 试剂中含防腐剂,避免接触皮肤、内膜,如不慎接触,即用大量流水冲洗。如不慎接触眼睛或吞咽,立即找医生救护。

3、操作时须做好个人安全防护,预防样本、试剂、校准品与人体直接接触。

4、开瓶用剩的试剂勿与新开瓶试剂混用,防止污染新开瓶试剂。

5、建议每天测定试剂空白,试剂更换批次时须进行校准。

6、试剂失效指标:试剂空白吸光度(A)<1.0,或产生沉淀、变色。

【参考范围

(4.0-15.4)μmol/L;上述参考范围仅供参考,建议各实验室建立本实验室参考值。

【储存条件与有效期】

试剂密封避光存贮于28℃,有效期12个月,不能冰冻。开瓶后有效期1个月。

【参考文献】

《全国临床检验操作规程》,第三版。

 


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