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【特别推荐】: 5'-核苷酸酶(5'-NT)测定试剂使用说明、性能指标  
发布者:idrfz.chen   
 

 (本试剂仅用于科研、实验、技术支持,不直接用于临床诊断)

【简介】

用于自动生化分析仪测定血清5'-核苷酸酶(5'-NT)活性。

5'-核苷酸酶广泛存在于肝脏和各种组织中,5'-核苷酸酶活性增高主要见于肝胆系统疾病,如肝炎、阻塞性黄胆、原发及继发性肝癌等,且通常其活性变化与ALP的活性变化相平行。但在骨骼系统的疾病,通常ALP活性增高,5-NT活性正常。所以,对ALP活性增高的患者,测定5'- NT有助于临床判断ALP活性增高是肝胆系统疾病还是骨骼系统疾病所引起。

【测定方法】

PNP-XTO-POD偶联连续监测法

【测定原理】

5-次黄嘌呤核苷酸+H2 5-NT >次黄苷+ NH4+

次黄苷+Pi PNP >次黄嘌呤+核糖-1-磷酸

次黄嘌呤XOD >尿酸+H2O2

H2O2+4-AAP+酚衍生物 POD >红色醌衍生物+H2O

动态监测红色醌衍生物的生成速率,可求得5'-NT活性。

【试剂盒组成】

 

    

    

    

试剂

液体双试剂,

试剂Ⅰ:试剂Ⅱ=21

缓冲液、4-AAPPNPXODPOD5’-IMP

适量

5'-NT校准品

冻干1ml

5'-核苷酸酶、稳定剂

见标签

5'-NT质控品

冻干1ml

5'-核苷酸酶、稳定剂

见标签

【样本要求】

标本以空腹血清为宜,避免溶血和脂血血清在2-8℃可稳定7天,-20可保存30天。

【测定步骤】

1.本试剂为液体双试剂,可直接使用。

2.测定参数:波长:550nm;光径:10mm;温度:37

3.测定方法:

加入物

空白管

校准管

测定管

试剂Ⅰ

180

180

180

蒸馏水(uL)

5

-

-

标准液(uL)

-

5

-

样本(uL)

-

-

5

混匀,置37℃孵育5分钟

试剂Ⅱ(uL)

90

90

90

混匀,置37℃延滞3分钟后读取各管吸光度,每隔1分钟读1次,共读2分钟,计算平均每分钟吸光度变化率ΔA/min

4.上机参数:

  

37

延迟时间

180

样本量

5uL

  

550nm

试剂Ⅰ

180uL

  

800nm

试剂Ⅱ

90uL

读数时间

120

5.计算:

             

(ΔAU/min –ΔAB/min

5'-NT活性(U/L)=                    ×准管活性

(ΔAS/min –ΔAB/min

【性能指标】

1 空白吸光度A550nm<0.050,空白吸光度变化速率ΔA/min0.0035

2 测定试剂定标后K=1800左右。

3 线性范围0-300 U/L (r >0.99)

4 批内/分析内精密度  CV5%;批间相对极差 8%;

5 准确性  相对偏差不超过±10%。

6 抗干扰性  血清胆红素<40mg/dLTG<1250mg/dL、血红蛋白<500mg/dL、抗坏血酸<20mg/dL时、碱性磷酸酶<1200U/L,对测定无显著影响。

7 方法对照  用本酶动力学测定试剂和某进口5’-NT连续监测法试剂盒 5'-Nucleotidase Test Kit 测定50例血清5’-NT活性,结果显示相关系数r = 0.991

【注意事项】

1、试剂和样品可因仪器要求不同,按比例增减,计算公式不变。

2、试剂请放2-8℃储存,避免冷冻、污染,否则将导致失效。

3、当标本浓度超过检测范围时,应用生理盐水稀释标本后再进行检测,标本值为测定值乘以稀释倍数。

4、请勿用嘴直接吸取试剂,避免接触皮肤、眼睛及粘膜,一旦接触,应即用水冲洗污染部位;

5、使用使用本公司提供的校准品校准,校准周期为60天,更换试剂批号时需要重新校准。使用正常值和病理值生化质控血清进行室内质控,测定的控制值应在确定的限制范围内,若控制值失控,实验室应采取适当的纠正措施。

【参考范围

成人  血清0-10 U/L37℃) 

建议各地建立本地区的参考值范围

【储存条件与有效期】

未开封的试剂在2-8℃避光条件下可稳定12个月,置37℃水浴至少可稳定7天。

试剂开封后,存放在分析仪试剂仓中的试剂在60天内性质稳定。

【参考文献】

1、, 叶应妩, ,王毓三 全国临床检验操作规程第二版 南京:东南大学出版社,1997 235-236.

2Joseph F..A New KineticDeterminationof Serum 5’-NucleotidaseActivity. Clincal Chemistry, , 1980,26(9, ):, 1, 2, 91, -1297.

 


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